EJEMPLO DE GENOTECA

Construccion de una genoteca de cDNA de Plasmodium falciparum y busqueda posterior del gen de calmodulina 

 

 

 

 Se construyeron dos genotecas de cDNA usando el método de Gubler y Hoffman, la primera partiendo del mRNA del parásito Pfalciparum, la segunda a partir del RNA total, ambas en estadio de trofozoítos maduros y esquizontes. Se enfatizó en la búsqueda por hibridización de clonos que tuvieran el gen de la calmodulina, proteína mediadora que sirve como receptor intracelular de calcio, regula una variedad de enzimas y posiblemente está relacionada con los procesos de invasión del eritrocito. Se buscaron otros genes de interés de las proteínas miosina y Amasa, también involucradas en el proceso de invasión del eritrocito por el parásito. J,os títulos de las genotecas de cDNA fueron 1,7 x lo4 ufp/pg de DNA, a partir de mRNA y 3,4 x lo4 ufp/pg de DNA a partir de RNA total. Los rendimientos de la síntesis de primera cadena de cDNA fueron entre 15 y 20 por ciento mayores a partir de RNA total que a partir de RNA mensajero (mRNA). Se obtuvieron trece clonos que hibridizaron con una sonda de calmodulina, dos de la genoteca de cDNA a partir del mRNA y once a partir del RNA total del parásito. También ocho clonos que hibridizaron con una sonda de miosina, uno de la genoteca de cDNA a partir del mRNA y siete a partir del RNA total del parásito; y cinco clonos que hibridizaron con una sonda de ATPasa, una a partir de la genoteca de cDNA a partir del mRNA y cuatro a partir del RNA total. Como alternativa para la construcción de genotecas de cDNA, se plantea la utilización de RNA total como material de partida. Sin embargo, es necesario validar el método en éste y otros organismos.

 

¿Que es una genoteca?

tomado de:

http://bases.bireme.br/cgi-bin/wxislind.exe/iah/online/?IsisScript=iah/iah.xis&src=google&base=LILACS&lang=p&nextAction=lnk&exprSearch=338179&indexSearch=ID

http://www.youtube.com/watch?v=QT7u1yqjzV8 

http://www.youtube.com/watch?v=Z2w6TJ9eWkY&feature=relmfu